熒光光譜儀是一種檢測物質的定性、定量分析儀器。其原理是根據熒光效應:激光照射原子,原子中電子吸收能量躍遷到第一激發單線態或第二激發單線態,但這些激發態是不穩定的,當電子由第一激發單線態恢復到基態時,能量會以光的形式釋放,產生熒光,一般持續發光時間短于10^-8秒(同時產生的磷光持續時間大于10^-8秒)。通過熒光光譜儀的檢測,可以獲得物質的激發光譜、發射光譜、量子產率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。
熒光光譜儀(熒光分光光度計)是測量熒光的儀器,主要由光源、激發單色器、樣品池、發射單色器和檢測器等組成。
(1)光源
由于熒光樣品的熒光強度與激發光的強度成正比,因此,作為一種理想的激發光源應具備:足夠的強度、在所需光譜范圍內有連續的光譜、強度與波長無關(即光源的輸出是連續平滑等強度的輻射)、穩定的光強。常用的光源主要有氙燈和激光器。
(2)單色器
熒光光譜儀中單色器一般為光柵或濾光片,需要兩個,一個用于選擇激發光波長(激發單色器),一個用于分離選擇熒光發射波長(發射單色器)。
(3)樣品池
熒光光譜儀用的樣品池材料要求無熒光發射,通常為熔融石英,樣品池四壁均光潔透明。對于固體樣品,通常固定在樣品夾的表面。
(4)檢測器
熒光的強度通常比較弱,因此要求檢測器有較高的靈敏度。一般采用光電倍增管(PMT),二極管陣列檢測器、電荷耦合裝置以及光子計數器等高功能檢測器也已得到應用。